آکادمی بیوانفورماتیک محققان ایرانی

#نکات_تکنیکی
در هنگام انجام Real-Time PCR (یا qPCR)، یکی از مشکلاتی که ممکن است رخ دهد، بخار شدن یا "evaporation#" نمونه‌ها است. این مسئله می‌تواند به دلایل مختلفی اتفاق بیفتد:

تنظیمات نادرست دما یا پروفایل حرارتی: در صورتی که دمای کالیبراسیون دستگاه PCR یا پروفایل حرارتی به درستی تنظیم نشده باشد، ممکن است در طول چرخه‌های PCR، بخار در لوله‌ها یا در نمونه‌ها ایجاد شود. به ویژه در دمای بالای مرحله دناتوراسیون (۹۴-۹۸ درجه سانتی‌گراد) ممکن است رطوبت از محیط خارج شود.

نصب نادرست درپوش دستگاه PCR: در صورتی که درپوش‌ها به طور کامل بسته نشوند یا به درستی مهر و موم نشوند، بخار به راحتی می‌تواند از نمونه‌ها خارج شود و بر نتیجه تاثیر بگذارد.

استفاده از لوله‌های PCR نامناسب یا شکسته: لوله‌های PCR که کیفیت مناسبی ندارند یا ترک خورده‌اند، ممکن است نتوانند به درستی نمونه‌ها را مهر و موم کنند و بخار از آنها خارج شود.

مدت زمان طولانی در دمای بالا: اگر نمونه‌ها مدت زیادی در دمای بالا باقی بمانند، به‌ویژه اگر با سرعت زیاد افزایش دما مواجه شوند، ممکن است بخار شدن در طی مراحل مختلف رخ دهد.

تنظیمات دستگاه در حالت بدون پوشش (Open system): بعضی از دستگاه‌های Real-Time PCR از یک سیستم "open" برای درپوش‌های لوله‌ها استفاده می‌کنند که می‌تواند باعث تبخیر نمونه‌ها و ایجاد نتایج غیر دقیق شود.

برای جلوگیری از بخار شدن نمونه‌ها در Real-Time PCR:

از لوله‌ها و کلاهک‌های PCR با کیفیت و مناسب استفاده کنید.
از برنامه‌های دمایی دقیق و مناسب برای مرحله‌های مختلف PCR استفاده کنید.
از دستگاه‌های PCR با سیستم مهر و موم خوب استفاده کنید.
در صورت امکان، از سیستم‌های "sealed" استفاده کنید که از تبخیر نمونه‌ها جلوگیری کنند.

👍5

www.tgoop.com/IRBioinformatics/1327

356 viewsNov 22, 2024 at 23:18

#نکات_تکنیکی
در هنگام انجام Real-Time PCR (یا qPCR)، یکی از مشکلاتی که ممکن است رخ دهد، بخار شدن یا "evaporation#" نمونه‌ها است. این مسئله می‌تواند به دلایل مختلفی اتفاق بیفتد:

تنظیمات نادرست دما یا پروفایل حرارتی: در صورتی که دمای کالیبراسیون دستگاه PCR یا پروفایل حرارتی به درستی تنظیم نشده باشد، ممکن است در طول چرخه‌های PCR، بخار در لوله‌ها یا در نمونه‌ها ایجاد شود. به ویژه در دمای بالای مرحله دناتوراسیون (۹۴-۹۸ درجه سانتی‌گراد) ممکن است رطوبت از محیط خارج شود.

نصب نادرست درپوش دستگاه PCR: در صورتی که درپوش‌ها به طور کامل بسته نشوند یا به درستی مهر و موم نشوند، بخار به راحتی می‌تواند از نمونه‌ها خارج شود و بر نتیجه تاثیر بگذارد.

استفاده از لوله‌های PCR نامناسب یا شکسته: لوله‌های PCR که کیفیت مناسبی ندارند یا ترک خورده‌اند، ممکن است نتوانند به درستی نمونه‌ها را مهر و موم کنند و بخار از آنها خارج شود.

مدت زمان طولانی در دمای بالا: اگر نمونه‌ها مدت زیادی در دمای بالا باقی بمانند، به‌ویژه اگر با سرعت زیاد افزایش دما مواجه شوند، ممکن است بخار شدن در طی مراحل مختلف رخ دهد.

تنظیمات دستگاه در حالت بدون پوشش (Open system): بعضی از دستگاه‌های Real-Time PCR از یک سیستم "open" برای درپوش‌های لوله‌ها استفاده می‌کنند که می‌تواند باعث تبخیر نمونه‌ها و ایجاد نتایج غیر دقیق شود.

برای جلوگیری از بخار شدن نمونه‌ها در Real-Time PCR:

از لوله‌ها و کلاهک‌های PCR با کیفیت و مناسب استفاده کنید.
از برنامه‌های دمایی دقیق و مناسب برای مرحله‌های مختلف PCR استفاده کنید.
از دستگاه‌های PCR با سیستم مهر و موم خوب استفاده کنید.
در صورت امکان، از سیستم‌های "sealed" استفاده کنید که از تبخیر نمونه‌ها جلوگیری کنند.

BY آکادمی بیوانفورماتیک محققان ایرانی