tgoop.com/SAMLS_GMU/2892
Last Update:
✅آزمایش شکنندگی اسمزی (OFT) و اهمیت آن در هماتولوژی
(Osmotic Fragility Test)
⭕️آزمایش شکنندگی اسمزی (OFT) یک ابزار تشخیصی پرکاربرد در هماتولوژی است که برای ارزیابی یکپارچگی ساختاری و عملکردی غشای سلول‌های قرمز خون (RBC) استفاده می‌شود. این آزمایش نحوه پاسخ سلول‌های قرمز خون به استرس اسمزی در محلول‌های هیپوتونیک را ارزیابی می‌کند و اطلاعات ارزشمندی درباره شرایطی که ویژگی‌های فیزیکی غشای سلولی را تغییر می‌دهند ارائه می‌دهد. درک دقیق اصول، روش انجام، کاربردها و محدودیت‌های این آزمایش، دید جامعی از اهمیت آن در تشخیص‌های هماتولوژیکی فراهم می‌کند.
اصول آزمایش شکنندگی اسمزی
⭕️آزمایش شکنندگی اسمزی بر این اصل استوار است که RBC ها هنگام قرار گرفتن در محلول‌های هیپوتونیک به دلیل ورود آب متورم می‌شوند. نقطه‌ای که این سلول‌ها پاره می‌شوند به یکپارچگی و انعطاف‌پذیری غشای سلولی و همچنین نسبت سطح به حجم آن‌ها بستگی دارد.
⭕️سلول‌های قرمز خون طبیعی دارای شکل دوک‌کونه‌ای هستند که به آن‌ها این امکان را می‌دهد تا تا حد مشخصی متورم شوند بدون اینکه پاره شوند. تغییرات در ترکیب غشا، ساختار اسکلت سلولی یا محتوای هموگلوبین می‌تواند این تحمل را تحت تأثیر قرار دهد و باعث شود سلول‌ها بیشتر یا کمتر در معرض همولیز قرار گیرند. با قرار دادن RBC ها در محلول‌های مختلف سدیم کلراید (NaCl)، آزمایش میزان همولیز را به عنوان معیاری برای شکنندگی غشا اندازه‌گیری می‌کند.
روش انجام آزمایش شکنندگی اسمزی:
1️⃣آماده‌سازی نمونه
➖خون در لوله ضد انعقاد معمولاً لوله‌های حاوی EDTA یا هپارین جمع‌آوری می‌شود.
➖نمونه باید به سرعت پردازش شود تا از تغییر ویژگی‌های سلول‌های قرمز خون به دلیل نگهداری یا آلودگی جلوگیری شود.
2️⃣ آماده‌سازی محلول‌های سدیم کلراید
➖یک سری لوله آزمایش با محلول‌های NaCl با غلظت‌های متفاوت تهیه می‌شود که معمولاً از ۰.۱٪ تا ۰.۹٪ متغیر است.
➖از آب مقطر برای ایجاد این محلول‌ها استفاده می‌شود تا دقت و سازگاری رقیق‌سازی‌ها تضمین شود.
3️⃣ افزودن نمونه خون
➖مقدار کمی خون (معمولاً ۵۰ میکرولیتر) به هر لوله حاوی محلول NaCl اضافه می‌شود.
➖لوله‌ها به آرامی مخلوط می‌شوند تا سلول‌ها به طور یکنواخت در محلول توزیع شوند.
4️⃣انکوباسیون
➖لوله‌ها در دمای اتاق یا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳۰ تا ۶۰ دقیقه انکوبه می‌شوند تا تعادل اسمزی برقرار شود.
5️⃣سانتریفیوژ
➖نمونه‌ها سانتریفیوژ می‌شوند تا سرم (حاوی هموگلوبین آزاد شده از سلول‌های پاره شده) از RBC های سالم جدا شود.
6️⃣اندازه‌گیری همولیز
➖سرم با استفاده از اسپکتروفوتومتر برای اندازه‌گیری محتوای هموگلوبین تجزیه شده بررسی می‌شود.
➖همولیز به عنوان درصد هموگلوبین آزاد شده نسبت به همولیز کامل (که با قرار دادن سلول‌ها در آب مقطر حاصل می‌شود) اندازه‌گیری می‌شود.
7️⃣ رسم منحنی شکنندگی
➖یک نمودار رسم می‌شود که غلظت NaCl در محور x و درصد همولیز در محور y قرار دارد.
➖سلول‌های قرمز خون طبیعی معمولاً از ۰.۴۵٪ NaCl شروع به همولیز می‌کنند و در ۰.۳٪ NaCl همولیز کامل می‌شود.
BY انجمن علمی علوم آزمایشگاهی گناباد
Share with your friend now:
tgoop.com/SAMLS_GMU/2892